Гликозилирование белков — это фундаментальный биологический процесс, который регулирует различные клеточные функции. Однако его изучение затруднено из-за сложности и низкой концентрации гликопротеинов. В передовом исследовании, опубликованном в журнале National Science Review, ученые из Фуданьского университета разработали стратегию обогащения гликопептидов на основе химического лигирования, называемую HG-TCs. Этот метод использует передовые твердофазные материалы и биоортогональную химию для одновременного определения нескольких типов гликозилирования, таких как N-гликозиты, O-GlcNAc сайты и O-GalNAc сайты, а также N-гликаны. Стратегия HG-TCs позволяет обогащать гликопептиды с использованием реакции азид-алкинового цикло-присоединения и высвобождать их путем расщепления трипсином. Такой одностадийный процесс сводит к минимуму потери образца и обеспечивает высокую воспроизводимость.
Этот подход предлагает быстроту выполнения с исключительной масштабируемостью, определяя более 900 O-GlcNAc сайтов и 800 N-гликозитов в клетках HeLa за один эксперимент при минимальном количестве образца. Исследовательская группа отметила, что даже между техническими повторениями гарантировать идентичные результаты остается сложной задачей. В комплексном анализе, картирование нескольких гликозилирований по отдельности может вызвать операционные и технические вариации, приводящие к непоследовательным данным, особенно для некоторых динамичных и сложных биологических моделей или систем. Поэтому HG-TCs очень благоприятны для изучения высокодинамичной и сложной углеводной системы, позволяя не только картировать несколько гликозилирований, но и одновременно отслеживать изменения различных гликозилирований.
Исследовательская группа также применила эту стратегию для анализа образцов клеток HeLa в условиях окислительного стресса. Они обнаружили различные пространственные паттерны гликозилирования между ядром и цитоплазмой, что дает ценные сведения о динамичных ролях гликозилирования в клеточных реакциях. Это исследование предоставляет мощный инструмент для исследований гликопротеомики, способствуя пониманию динамичных ролей гликозилирования в клеточной сигнализации и механизмах заболеваний. Для исследователей в области гликопротеомики данный метод представляет собой значительный прогресс, упрощая сложные рабочие процессы при сохранении высокого качества данных. Полученные результаты особенно важны для изучения изменений гликозилирования при раке и других заболеваниях.
Источник: NewsMedical
